近幾年,轉(zhuǎn)基因食品成為人們熱議的話題之一,所謂的轉(zhuǎn)基因食品,就是通過基因工程技術(shù)將一種或幾種外源性基因轉(zhuǎn)移到某種特定的生物體中,并使其有效地表達(dá)出相應(yīng)的產(chǎn)物(多肽或蛋白質(zhì)),此過程叫轉(zhuǎn)基因。當(dāng)前,社會上轉(zhuǎn)基因食品越來越多,而轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù)也在不斷發(fā)展和完善。
根據(jù)轉(zhuǎn)基因食品來源的不同可分為植物性轉(zhuǎn)基因食品、轉(zhuǎn)基因酵母疫苗、轉(zhuǎn)基因工程菌、動物性轉(zhuǎn)基因食品和微生物性轉(zhuǎn)基因食品。目前,我國的不少轉(zhuǎn)基因因技術(shù)屬水平,但應(yīng)用很少。
轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù)
由于轉(zhuǎn)基因物質(zhì)有可能在耕種、收割、運輸、儲存和加工過程中混入食品,對食品造成偶然污染。因此,不論是對轉(zhuǎn)基因食品貼示標(biāo)簽,或是對轉(zhuǎn)基因與原料進(jìn)行分別輸送,轉(zhuǎn)基因原料和舊食品的檢測都是必不可少的;另外,要區(qū)分轉(zhuǎn)基因與食品,對轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行選擇性標(biāo)記,對食品中的轉(zhuǎn)基因含量的多少加以限制,也需要準(zhǔn)確有效的基因檢測技術(shù)。
目前,轉(zhuǎn)基因存在的檢測方法主要有prc(凝合酶鏈反應(yīng))技術(shù)、凝膠電泳測序和elisa(酶聯(lián)免疫法)等,這些方法在食品和醫(yī)藥研究方面都有廣泛的使用,其中以prc技術(shù)為成熟。該技術(shù)是由美國Centus公司的Karymullis發(fā)明,于1985年由saiki等首次報道,是近年來開發(fā)的體外快速擴增dna技術(shù)。1988年,r.k.saiki等人又成功地將熱穩(wěn)定taqdna聚合酶應(yīng)用于pcr擴增,是pcr技術(shù)上向?qū)嵱没囊淮瓮黄菩缘倪M(jìn)展。通過pcr技術(shù)可以簡便快速地從微量生物材料中以體外擴增的方式獲得大量特定的核酸,并且有很高的靈敏度和特異性。pcr既可做定性又可做定量分析,目前大多以定性檢測為主,定性檢測的檢出范圍為0.1。但該項技術(shù)的檢測結(jié)果也有可能與實際不相符合,會出現(xiàn)假陰性或假陽性結(jié)果(即檢測物質(zhì)本身含有轉(zhuǎn)基因物質(zhì),而未被檢出;或是本身沒有轉(zhuǎn)基因物質(zhì),而檢出有轉(zhuǎn)基因成分)。
由于許多獲得批準(zhǔn)的遺傳工程體(gmo)表現(xiàn)出一定的導(dǎo)入基因的性狀,因此,基因檢測也需要以蛋白質(zhì)為基礎(chǔ)的檢測技術(shù),這就出現(xiàn)了elisa法。1971年Engvall和Perlman發(fā)表了有關(guān)酶聯(lián)免疫吸附分析法用于免疫球蛋白g(igg)定量測定的文章,使該技術(shù)發(fā)展成為液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。elisa法與pcr法相比具有操作簡單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確,有高通量的特性,解決了轉(zhuǎn)基因檢測中樣品核酸制備的困難,同時降低了檢測成本和時間高的催化效率,可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達(dá)到很高的靈敏度和穩(wěn)定性。但該項技術(shù)主要應(yīng)用于原料和半成品分析,在終產(chǎn)物分析方面靈敏度底于pcr法。另外,該項技術(shù)還需要特殊的抗體和“新”的表達(dá)蛋白,而食品中的這類“新”蛋白質(zhì)的含量極低,且在加工過程中蛋白質(zhì)常會發(fā)生變化;該分析法同時還需要熟練的操作技術(shù)。這些因素都使elisa法在轉(zhuǎn)基因檢測應(yīng)用上受到了一定的限制。
轉(zhuǎn)基因食品的檢測方法
前轉(zhuǎn)基因的檢測方法轉(zhuǎn)基因作物檢測方法大體分為兩種:一是檢測是否含有外源蛋白,即外源基因表達(dá)產(chǎn)物,主要采用酶聯(lián)免疫吸附法和試紙條法;二是檢測是否含有外源基因(DNA),主要有Southern雜交技術(shù)、基因芯片法和PCR檢測法。理論上來說,以上所介紹的轉(zhuǎn)基因檢測方法,只要改變相應(yīng)的檢測靶標(biāo),都可檢測不同的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品。
但是實際應(yīng)用中,以檢測外源蛋白的轉(zhuǎn)基因檢測方法存大很大的局限性,食品的復(fù)雜成分會干擾檢測效果,并且加工過的轉(zhuǎn)基因食品中的蛋白質(zhì)抗原性很容易受破壞,從而會影響檢測結(jié)果的靈敏度。此外,該方法需要大量的抗體和抗原。目前,商品化的ELISA檢測試劑盒和膠體金試紙條只能檢測少數(shù)幾種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品,且一種試劑盒或試紙條只能針對某一特定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物,不能針對多種混合成分的食品樣品進(jìn)行檢測。
然而,基因水平的檢測方法是有范圍廣的優(yōu)勢,只要樣品中有DNA存在,就能被檢測,不受食品混合、復(fù)雜成分的干擾,適用于轉(zhuǎn)基因原料、初加工和深加工食品的檢測,而且有很好的特異性和靈敏度,已經(jīng)發(fā)展為常用的轉(zhuǎn)基因食品檢測方法。目前,所有商業(yè)化的轉(zhuǎn)基因食品都有相應(yīng)的PCR檢測方法標(biāo)準(zhǔn)。目前,轉(zhuǎn)基因PCR檢測產(chǎn)品多數(shù)產(chǎn)自國外,價格都比較高,國內(nèi)杭州有個化工儀器網(wǎng)的平臺,轉(zhuǎn)基因檢測產(chǎn)品在算是國內(nèi)齊全的,有儀器及配套試劑。